Исследование крови

Кровь является внутренней средой организма, обеспечивающей нормальное функционирование всех органов и тканей живого организма, отражающей в большей или меньшей степени все нарушения их функций.

Кровь называют "зеркалом", в котором отражаются самые различные процессы, происходящие во всех органах.

Общая структура исследований крови

I. Методы исследований:

1) гематологические;

2) биохимические;

3) иммунологические;

4) микробиологические:

а) бактериологические;

б) вирусологические;

в) паразитологические;

5) системы гемостаза;

II. Объекты исследований:

1) венозная кровь;

а) цельная кровь;

б) сыворотка;

в) плазма;

г) гепарипизироваиная, цитратпая, оксалатиая кровь

2) капиллярная кровь (цельная, гепарипизироваиная, цитратпая и оксалатиая).

К гематологическим методам исследования относятся:

1) определение гемоглобина крови;

2) определение свободного гемоглобина плазмы;

3) определение фракций гемоглобина;

4) подсчет эритроцитов в крови;

5) определение гематокритпой величины (показателя);

6) определение осмотической резистентности эритроцитов;

7) подсчет ретикулоцитов;

8) подсчет тромбоцитов;

9) определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ);

10) подсчет лейкоцитов;

11) подсчет лейкоцитарной формулы с описанием морфологии форменных элементов крови;

12) подсчет миелокариоцитов;

13) подсчет мегакариоцитов;

14) подсчет мислограммы и характеристика костномозгового кроветворения;

15) подсчет сидероцитов и сидеробластов (в мазках периферической крови, в мазках костного мозга);

16) обнаружение клеток красной волчанки (LE-клеток) и другие методы.

Взятие крови

Палец пациента протирают ватой, смоченной в спирте, а затем тугим стерильным ватным тампоном. Делают прокол кожи пальца на глубину 4 мм, ближе к его боковой поверхности. Первую выступившую каплю крови удаляют стерильным сухим ватным тампоном, а затем берут кровь для исследования (она должна вытекать свободно, без надавливания). В последних каплях свободно вытекающей крови определяют тромбоциты.

Определение концентрации гемоглобина гемоглобинцианидным методом: к 5 мл трансформирующего раствора прибавляют 20 мкл крови (разведение в 251 раз), тщательно перемешивают и оставляют стоять 10 минут. Затем измеряют оптическую плотность опытной пробы, сравнивая с холостой пробой на медицинском калориметре при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см.

Нормальная концентрация гемоглобина в крови у женщин 120-140 "/,, У мужчин 130-160`;/. Содержание в крови гемоглобина ниже критического (20-30 г/л) может привести к летальному исходу.

Определение количества эритроцитов в 1 л крови: капиллярной пипеткой набирают 20 мкл крови, копчик пипетки осторожно вытирают, кровь выдувают в пробирку, содержащую 0,9% Na C1 (хлорид натрия). Пипетку тщательно промывают в верхнем слое жидкости, содержимое пробирки перемешивают. Подсчет ведется в камере Горяева, после заполнения которой оставляют на 1 мин. в состоянии покоя для оседания форменных элементов. Подсчет ведут при малом увеличении микроскопа (объектив 8х, окуляр 10х или 15х) при опущенном конденсоре в 5 больших квадратах (расчерченных на 16 малых), расположенных по диагонали.

Количество эритроцитов в 1 мкл крови определяют по формуле:

Y== Ax 4000 х 200 гчл

X - количество эритроцитов в 1 мкл

А - количество эритроцитов в 80 малых квадратах

200 - степень разведения крови

4000 - множитель, приводящих результат к объему 1 мкл крови, т.к. объем малого квадрата Уто мкл.

Практически количество эритроцитов, подсчитанное в 80 малых квадратах, умножают на 10 000.

Пересчитывая эритроциты в единицы системы Сй-Т (Тэра) в 1 л., полученную цифру умножают еще па 1 000 000.

В норме количество эритроцитов у женщин составляет 3,7-4,7 T/f у мужчин 4-5,1 т/.

Уменьшение числа эритроцитов характерно для анемии, степень его различна в зависимости от ее вида.

Определение количества лейкоцитов в 1 л крови:

капиллярной пипеткой набирают 20 мкл крови и вносят в пробирку с 0,5%-ной уксусной кислотой, пипетку промывают раствором, содержимое хорошо перемешивают. Подсчет ведут в камере Горяева, заполнив которую, оставляют на 1 мин. в состоянии покоя для оседания лейкоцитов. Подсчет ведут при малом увеличении микроскопа (объектив 8х, окуляр 10х или 15х) при опущенном конденсоре в 100 больших квадратах, что соответствует 1600 малым.

Количество лейкоцитов в 1 мкл крови считают по формуле:

А х 4000 х 20

Х 1600

X - количество лейкоцитов в 1 мкл

А - количество лейкоцитов, сосчитанных в 100 больших квадратах

1600 - количество малых квадратов

20 - разведение крови

4000 - множитель, приводящий результат к объему 1 мкл крови, исходя из объема малого квадрата (Уто мкл).

Практически количество лейкоцитов, подсчитанное в 1600 малых квадратах, умножают на 50, а для перевода в единицы СИ (Гига в 1 л.) полученную цифру умножают па 1000000.

В норме количество лейкоцитов колеблется: 4-8,8 /л.

Определение скорости оседания эритроцитов:

с помощью капилляра Панчепкова набирают из пальца кровь два раза до метки "К" и вносят каждый раз в пробирку с цитратом натрия, смешивают, набирают эту смесь до метки "О" и ставят в штатив Панчепкова на 1 ч. в строго вертикальном положении. Скорость оседания выражают в мм за 1 ч.

В норме СОЭ у женщин составляет 2-15 мм/, для мужчин 1-10 мм/.

Определение количества ретикулоцитов:

можно проводить пробирочным методом; для этого к красителю азура 11 в количестве 0,05 мл помещают в пробирку, после чего в нее вносят 20 мкл крови, тщательно перемешивают и через 20-30 минут готовят мазки. Эритроциты при этом окрашиваются в желтовато-зеленый цвет, а субстанция - в синий.

Ретикулоциты подсчитывают па 1000 эритроцитов, выражают в процентах.

В норме в крови содержится 0,2-1,2% ретикулоцитов.

Определение цветового показателя осуществляется вычислением по формуле:

ЦП = количество гемоглобина (г/) х 3/ на первые две цифры выявленного числа эритроцитов в 1 мкл крови.

Приготовление мазков крови: на предметное стекло наносят небольшую каплю крови и шлифованным предметным стеклом прикасаются к ней под углом 45 градусов. После того, как капля растекается, между стеклами делают мазок справа налево до тех пор, пока капля полностью не распределится.

Окраску мазков крови осуществляют по Паппепгейму или Романовскому.

Окраска по Паппенгейму: сухие нефиксированные мазки помещают в контейнер и опускают в кювету с раствором красителя-фиксатора Май - Грюнвальда на 5 мин., после чего контейнер с мазками ополаскивают в кювете с дистиллированной водой и докрашивают красителем Романовского (1-2 кайли на 1 мл воды) на 10-15 минут. Затем смывают водой и высушивают па воздухе.

Окраска по Романовскому осуществляется так же, как и по Паппенгейму, но фиксируется не реактивом Май-Грюнвальда, а этиловым спиртом (20-30 мин.).

Подсчеты лейкограммы следует проводить в топких участках мазка, по верхнему и нижнему краю, передвигая мазок но линии меандра, начиная с самого края. Результаты подсчета лейкоцитов являются относительными, так как они изменяются в зависимости от общего количества лейкоцитов. При оценке данных лейкограммы помимо процентного содержания лейкоцитов следует учитывать их абсолютные величины.

Лейкоциты у взрослого в норме в % и в ед. СИ (г/) составляют:

1. Базофильпые грапулоциты - 0-1% - 0-0,065 /

2. Эозииофильпые грапулоциты - 0,5-5% - 0,2-0,3 }/

3. Палочкоядерпые нетрафильные грапулоциты - 1-6% -0,04-0,3 г/л

4. Сегментоядерные нетрофильные грапулоциты - 47-72% -2,0-5,5 1

5. Мо ноциты - 3-11% - 0,09-0,6

6. Лимфоциты - 19-37% - 1,2-3,0 т/л

Относительный и абсолютный нейтрофилез наблюдается при выраженных воспалительных процессах (таких, как сепсис, менингит, перитонит, остеомиелит и др.). Появление молодых форм (мислобластов. миелоцитов, метамиелоцитов, промиелоцитов) наблюдается при лейкозах, лейкемоидиых реакциях и др.

Относительная и абсолютная иейтропения наблюдается при вирусных инфекциях, облучении, брюшном тифе, лейшмапиозе.

Эозипофилия отмечается при гельмиптозах, хроническом миело-лейкозе, ревматизме, бронхиальной астме и др.

Лимфоцитоз относительный характерен для ряда заболеваний: острый лейкоз, брюшной тиф и паратиф, бруцеллез, лейшманиоз. Абсолютный лимфоцитоз характерен для вирусных инфекций, отмечается при хроническом лимфолейкозе.

Абсолютная лимфоцитопения наблюдается под воздействием ионизирующей радиации на организм.

Моноцитоз характерен для хронических инфекций: бруцеллеза, туберкулеза, малярии, сифилиса и др.

Схема кроветворения представлена на рис. 24. Изменение картины при различных патологических состояниях представлено на рис.25, 26, 27, 28.

Определение количества тромбоцитов в мазках крови осуществляется на 1000 эритроцитов и умножается на абсолютное число эритроцитов в 1 мкл крови пациента.

В норме число тромбоцитов в крови составляет 180-320 г/. Тромбоцитоиепия до ЗО1/^ является критической, ниже которой можно ожидать появление геморрагии.

Гематокритная величина устанавливает соотношение между объемом форменных элементов крови и всем объемом крови. Определяется с помощью центрифугирования гепарипизировашюп или цитратной крови в специальных капиллярах. В качестве гематокрштюй трубочки могут использоваться пипетки Панченкова, стянутые резиновым кольцом. Центрифугируют 30 мин. при 3000 об/МП1. В норме общий объем эритроцитов у мужчин равен 0.4-0,48 л/ у женщин - 0,36-0,42 -у

Осмотическая резистентность эритроцитов крови определяется по способности эритроцитов набухать и гемолизироваться в гипотонических растворах. Перед исследованием готовят серию растворов с нисходящим разведением натрий хлорида от 0,7 до 0,2 %. Минимальную резистентность оценивают по пробирке с самой высокой концентрацией NaCl, в которой улавливается порозовение жидкости, а максимальную - по пробирке с самой низкой концентрацией NaCl, в которой незаметно осадка, а жидкость окрашена в розовый цвет. В норме минимальная резистентность эритроцитов у взрослых колеблется между 0,48 - 0,46 %, максимальная - между 0,34 - 0,32 % NaCl. Осмотическую резистентность эритроцитов крови из вены можно определить на ФЭКе (унифицированный метод) при длине волны 500-560 им (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 10 мм., сравнивая с холостой пробой (надосадочная жидкость - в пробирке, содержащей 1% раствора натрия хлорида).

Осмотическая резистентность понижена при гемолитических анемиях, повышена при железодефицитных анемиях, спленэктомии и др.

В настоящее время все большее получают распространение в практическом здравоохранении гематологические анализаторы, в основе их работы лежит создание электрического поля в апертуре, через которую проходят клетки крови, суспензированные в изотоническом растворе, создавая сопротивление, прямо пропорциональное их размерам.

Основные параметры, определяемые гематологическими анализаторами:

WBC, х 1/1 - лейкоциты, RBC, х 1/ - эритроциты, HGB, ,/- гемоглобин, НСТ, % - гематокрит,

MCV, мкм кубический - средний объем эритроцитов, МСНС, % - средняя концентрация гемоглобина в эритроците.

Нарушения белкового обмена связаны главным образом с изменением содержания общего белка, альбуминов, глобулинов и их фракций, а также их соотношения.

Гипопротеипемия встречается при хронических гепатитах, интоксикациях, циррозах, злокачественных новообразованиях и др.

Гиперпротеинемия наблюдется при эксикозах миеломной болезни и др.

Из флокуляционных проб в настоящее время чаще всего используют тимоловую пробу. Она достаточно информативна для оценки функционального состава печени (при вирусном гепатите, циррозе печени). В случаях механической желтухи проба отрицательна.

В норме у взрослых общий белок - 65-85 г/л

альбумин - 0,55-0,69% ( 35- 50 г/л)

глобулины: альфа 1 - 0,02-0,06 % альфа2 - 0,06-0,11 % бета - 0,08-0,14 % гамма - 0,11-0,18 %

Тимоловая проба - 0-6 ед. Альбумин и глобулиновые фракции определяются методом электрофореза.

Азотистый обмен включает реакции синтеза и распада белков, нуклеиновых кислот, аминокислот, нуклеотидов и др. азотсодержащих соединений.

Содержание остаточного азота и его компонентов в сыворотке крови здорового человека:

Остаточный азот - 0,20-0,40 г/

Мочевина - 2,5-8,33мл,а,ь/1

Аминоазот - 0,020-0,050 *

Мочевая кислота - 0,12-0,24 лмоль/1

Креатин - 102-408 мю,оль/1

Креатипип - 62-123 МКМ(,ль/.1

Индикан - 0,87-3,13 мкмоль/1

Ксантоиротеиповая реакция - 20 у.е.

Содержание азотсодержащих веществ в крови увеличивается при острых и хронических заболеваниях почек, застойной сердечной недостаточности, обезвоживании и др.

Исследование показателей липидного обмена нашло широкое применение в клинической лабораторной диагностике ввиду значимости выявления гиперлипидемий как фактора риска развития атеросклероза.

Для выявления нарушений углеводного обмена клинико-диагностическое значение имеют определение содержания глюкозы в крови, моче и проведение тестов толерантности к глюкозе. Исследование проводят ортотолуидиновым и глюкозооксидазпым методом.

Нормальные величины концентрации глюкозы в плазме крови составляют 4,22-6,11, в сыворотке - 3,03-5,55, в спинномозговой жидкости - 2,78-3,89 ммоль/.

Гипергликемия развивается при сахарном диабете, тиреотоксикозе, болезни Кушинга, панкреатите, остром инфаркте миокарда и др.

Гипогликемия развивается при заболеваниях поджелудочной железы, болезни Аддисона, гипотиреозе, синдроме Золиптера-Эллисона и др.

Основным показателем пигментного обмена является билирубин, образующийся в клетках ретикулоэндотелиальной системы, находящихся в печени, селезенке, костном мозге. В крови билирубин является нормальной составляющей частью сыворотки крови. Содержание общего билирубина в сыворотке крови здоровых людей колеблется от 8,55 до 20,52 из них 75% приходится на долю непрямого (свободного) билирубина.

Исследование пигментного обмена осуществляется, главным образом, для дифференциальной диагностики желтух.

Определение активности ферментов наиболее широко используется при диагностике первичных врожденных фермептоиатий, а так же вторичных, т.е. развивающихся в результате патологических нарушений в органах на клеточном и субклеточном уровнях. Изменение активности одних и тех же ферментов может наблюдаться при самых различных заболеваниях и, следовательно, не является специфичным для какой-либо патологии. В связи с этим определение активности ферментов имеет диагностическую значимость только при сопоставлении с изменением других показателей и клинической картиной в целом.

Определение активности большинства ферментов осуществляется на анализаторах или калориметрах. Так определяются алаиинами-потрапсфераза (АЛТ) 0,1-0,45 ™юль// ^ или 12-35 ЕД/^ асиартатамипот-рансфераза(АСТ) 0,2-0,55 ММ(,ЛЬ// ^ или 15-30^,/ и другие ферменты.

Для определения изофермеитов ЛДГ (лактатдегидрогепазы) используют электрофоретический и иммунохимический методы, по можно использовать и калориметрический метод.

Увеличение активности АлАТ (АЛТ) характерно в дожелтушпый и начальный желтушный период вирусного гепатита. При вирусных же гепатитах, циррозах печени отмечается увеличение активности изофермепта ЛДГ5.

Увеличение активности ACT, ЛДГ1 и ЛДГ2 лактатдегидрогепазы может быть связано с поражением сердечной мышцы. Этому соответствует повышение активности креатинфосфокииазы (КК), ее изоэизима (MB).

Щелочная фосфатаза (ЩФ) является маркером остеобластов. Активность ее повышается и при вторичном холестазе, паренхиматозн ой желтухе, циррозе, лимфограиуломатозе, инфекционном монопуклеозе, остеомаляции, гипотиреозе и др.

Альфа-амилаза - вырабатывается поджелудочной и слюнной железами. Высокая активность наблюдается при остром панкреатите, желчекаменной болезни, опухолях легких, паротите и др.

Исследование минерального (электролитного обмена) в клинической практике используется совместно с исследованием кислотно-основного состояния крови (КОС или газов крови). В связи с развитием научно-технического прогресса определение этих показателей ведется с применением плазменных фотометров, иопоселективпых анализаторов и других современных приборов.

Выявляются состояния:

I. ацидоза или П. алкалоза

1. метаболического 1. метаболического

2. дыхательного 2. дыхательного

3. смешанного

Это позволяет своевременно корригировать проводимую экстренную дезиптоксикационную терапию.

Определение содержания в крови соответствующих гормонов позволяет выявить нарушение гормонального фона и корригировать с учетом их количества проводимое лечение.

К основным иммунологическим методам исследования относятся:

1. Определение группы крови по системе АВО и резус-фактора (RH-фактора).

Групповая принадлежность крови определяется при помощи стандартных сывороток. В основе определения лежит реакция изогемагглю-тииации, т.е. реакция агглютииа и эритроцитов испытуемого с известной сывороткой, содержащей антитела.

Группы крови - генетически обусловленный фактор.

Каждую группу крови можно кратко охарактеризовать следующим образом:

Первая группа - 0а/9(1): в эритроцитах агглютииогены отсутствуют, в плазме содержатся оба агглютинина - альфа и бета.

Вторая группа - A fl (II): в эритроцитах имеется агглютиноген А, а в плазме содержится агглютинин бета.

Третья группа - В а (Ш): в эритроцитах содержится агглютиноген В, а в плазме - агглютинин альфа.

Четвертая группа - АВ0 (IV): в эритроцитах содержатся оба агглютиногепа (А и В), а в плазме агглютининов нет.

Агглютииогеиы А и В неоднородные, поэтому имеется большое разнообразие групповых комбинаций с учетом изоаптигепов.

Берется для определения группы крови по две стандартные сыворотки (с различными сериями) каждой из групп. Получается па тарелке два ряда капель сывороток соответствующих групп крови. К ним добавляются эритроциты пациента в соотношении 1:10 (1 капелька эритроцитов к 10 капелькам (1 большая капля) сыворотки). Тщательно перемешивают капли (эритроцитов с сывороткой), покачивая тарелку, затем на 1-2 мин. оставляют в неподвижном виде и снова периодически покачивают в течение 5 мин., проводят учет реакции агглютинации.

Резус-фактор в качественном отношении неоднороден: выделены 6 различных антигенов: Rho(D)-Hro(d); hrv(C)-hrv(c); rh"(E)-hr"(e).

Лабораторное определение резус-принадлежности основывается па выявлении в крови обследуемого антигенов антирезус при помощи стандартной сыворотки анти Rho(D). Это позволяет установить резус-положительность и резус-отрицательпость крови. При этом учитывают групповую специфичность сыворотки антирезус по системе АВО.

На дно пробирки вносится капля стандартного реагента антирезус и капля исследуемой крови (или эритроцитов). Тщательно перемешивают встряхиванием и поворачивают в течение 3 минут. Для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2-3 мл изотопического раствора натрия хлора и перемешивают (не взбалтывая) путем 2-3-кратного перевертывания пробирки.

Наличие агглютинации в виде крупных хлопьев из эритроцитов па фоне просветленной жидкости указывает на резус-положительную принадлежность исследуемой крови, отсутствие агглютинации - на резус-отрицательную.

После определения группы крови и резус-фактора в случае необходимости гемотрансфузией донорской крови проводят определение групповой и резусной совместимости донора и реципиента, т.к. существуют изоантигепы, способные гемагглютинировать донорскую и реципиентную кровь.

2. Определение неспецифической иммунологической реактивности, включающей в себя определение следующих аналитов:

а) гемолитической активности комплемента;

б) содержания в сыворотки крови пропердипа;

в) лнзоцима;

г) интерферона, белков острой фазы;

д) фагоцитарной активности лейкоцитов, изучение миелопероксидазы и НСТ-теста;

е) реакции блаеттрапсформации лимфоцитов и другие.

Эти показатели отражают готовность организма противостоять воздействию бактерий и некоторых вирусов.

3. Определение специфической иммунологической реактивности, в основе которой лежит специфичность взаимодействия реакции антиген-антитело, формирующей иммунный ответ па чужеродный агент, являющийся важной и необходимой задачей для выявления контроля коррекции и иммунодефицитных состояний.

Основными методами оценки специфической реактивности являются:

а) определение Т- и В- лимфоцитов и их субпопуляций (клеточный иммунитет). Это возможно:

- методами розеткообразования с эритроцитами барана или мыши. Поверхностные рецепторы, специфичные для различных субпопуляций лимфоцитов, связывают введенные в субстрат эритроциты барана (пативиые или нагруженные антителами) к этим рецепторам, вследствие чего вокруг лимфоцита образуется розетка, состоящая из лимфоцита и 3-5 присоединенных эритроцитов;

- методами моноклональпых антител, используя соответствующие мопосиецифические сыворотки, различающиеся по СД-рецепторам. Основными, наиболее часто используемыми в клинической практике, являются следующие:

СД(3) - Т-лимфоциты

СД(4) - Т-лимфоциты-хелперы/иидукторы

СД(8) - Т-лимфоциты-сунрессоры

СД(16) - NK (натуральные киллеры)

СД(72) - В-лимфоциты

Исследование проводится на люминесцентном микроскопе или проточном питометре.

Выделение лимфоцитов для обоих методов ведется на градиенте плотности фиколл-верографии (1,077v/ ) гепаринизировашюй крови (8-10 мл венозной крови с 1-2 каплями гепарина) с последующим инкубированием или с эритроцитами барана, или с моноклональными антисыворотками.

По их количественному содержанию, а также их соотношению можно судить об иммунных нарушениях (врожденных или приобретенных), имеющих полиэтиологическую природу.

Синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД) связан с поражением рецепторов СД 4 (хелиеров-ипдукторов) лимфоцитов;

б) определение количества иммуноглобулинов в крови (гуморальный иммунитет) возможно методами:

- радиальной иммуподиффузии в геле с моноспецифическими сыворотки по Маичиии,

- пефелометрически с моноспецифическими сыворотки по Чиркшгу,

- иммуноферментным методом на ИФА.

Количественное определение иммуноглобулинов классов А, М, G в крови имеет диагностическое значение при врожденных иммунодефицитных состояниях, мне ломкой болезни, для определения степени поражения при вирусных гепатитах и др.

При многих заболеваниях этот показатель важен для дифференциальной диагностики и прогноза. Уровень содержания иммуноглобулинов помогает судить об активности патологического процесса и стадии заболевания;

в) определение циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК).

Осуществляется в сыворотке крови нефелометрическим методом.

ЦИК играют важное значение в патогенезе ряда инфекционных и неинфекционных заболеваний, например, иммунном гломерулонефрите.

4. К факторам неспецифической резистентности для определения активности воспалительного процесса и дифференциальной диагностики ревматизма, ревматоидного процесса относятся:

- определение С-реактивпого белка в сыворотке крови

- определение ревматоидного фактора в сыворотке крови

- определение активности анто-О-стреитолизипа в сыворотке крови.

5. Серологическое исследование с целью диагностики сифилиса осуществляется в реакции микропреципитации с кардиолипииовым антигеном и служит для ориепитировачной постановки сифилиса. В связи с тем, что возможны спонтанные агглютинации, возникающие при постановке реакции микронреципитации с кардиолипииовым антигеном, необходим о дальнейшее исследование сыворотки крови в случае положительного результата. Дальнейшее исследование проводится в развернутой реакции Вассермапа или иммунофермеитпым методом.

6. Серологическое исследование для диагностики инфекционных болезней:

а) вирусного гепатита

Различают вирусы, передающиеся эптеральпым путем заражения:

HAV - вирус гепатита А

HEV - вирус гепатита Е; и вирусы, передающиеся парентеральным путем заражения:

HBV - вирус гепатита В

HCV - вирус гепатита С

HDV - вирус гепатита D

HGV - вирус гепатита G.

Вирусные гепатиты могут быть вызваны и другими вирусами, как в моно-, так и в микстипфекции с вышеназванными вирусами (EBV - вирус Эпштейн-Барра, CMV - цитомегаловирус, HSV - вирус простого герпеса и др.).

Определение маркеров вирусного гепатита осуществляется сложными иммунологическими тестами с применением соответствующего оборудования.

Антиген HAV определяется методами иммуиоэлектрошюй микроскопии, радиоиммушюго и иммупофермептиого анализа, лаитагшдпого имму-иофлюоресцентного анализа, иолимеразной цепной реакции (ПЦР), методом гибридизации и Саутерп-блотом.

Антитела HAV определяются иммуноферментным методом.

Ag HEV и антитела HEV определяются методами иммуноферментного анализа.

Маркерами вирусного гепатита В являются его антигены:

HBs Ag - поверхностный

НВс Ag - сердцевидный

НВе Ag - инфекционности

НВх Ag , и антитела к Ag.

Они определяются методами иммуноферментного анализа полимеразной цепной реакцией, методом гибридизации, Саутерп-блотом.

Определение этих антигенов и антител классов М и G позволяют не только поставить диагноз, но и установить клиническую форму и период инфекции.

Маркерами вирусного гепатита С являются Ag, определяющие шесть основных генотипов и 80 субтшюв, в связи с чем имеются трудности при разработке диагностических тест-систем и профилактических вакцин.

Диагностика HCV осуществляется методами иммуноферментного анализа, рекомбинаптного иммуноблотинга, нолимеразной ценной реакцией, методом гибридизации.

Маркерами HDV являются HD Ag, обнаруживаемые в сыворотке крови методом иммупоферментпого анализа, нолимеразной цепной реакцией, Нортен-блотом.

По титру антител HDV Ag G можно судить о коинфекции или супериифекции.

Маркерами HGV являются обнаружены Ag HGV методами амплификации с предварительным этапом обратной транскрипции (RT-PCR). Обнаружение антител HGV возможно методами иммуноферментного анализа.

Антигены вирусов EBV, CMV, HSV определяются в реакциях иммуноферментного анализа, нолимеразной цепной реакцией и др.

б) реакции пассивной гемагглютипации с эритроцитарными ди-агностикумами (сальмопеллезным, дизентерийным,сыпнотифозным, иерсиниозиым, дифтерийным и другими), служащие для диагностики инфекционных заболеваний.

РИГА, РСК (реакции связывания комплемента), РА (реакции агглютинации) имеют широкое применение в практической медицине сегодня. Но па смену им идут новые, все более сложные методы, позволяющие более быстро и точно интерпретировать полученные данные. Так, например, использование телерадиометрии при постановке РИГА позволяет улавливать более низкие титры антител.

7. Иммунология крови в настоящее время перестает быть изолированной, оторванной от других наукой, она широко шагнула в практическую медицину, образовав па стыке с другими науками новые отделы - такие, как иммунохимия, иммуногенетика, проводящая генетическое картирование кластеров генов, кодирующих антигены системы HLA (главного комплекса гистосовместимости), позволяющая на ранних этапах прогнозировать развитие тех или иных болезней.

Бактериологические методы исследования крови.

Сепсис, бактериемию могут вызывать практически все микроорганизмы, относящиеся к патогенным и условпопатогенным микроорганизмам. Наиболее часто выделяются следующие: Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Aerococcus viridans, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella sp., Iersinia sp., Candida sp., Salmonella typhi, paratyphi и др. Кровь для посева следует брать, соблюдая правила асептики, во время подъема температуры, в начале появления лихорадки, до начала специфического антибактериального и химиотерапевтического лечения. Сеять нужно достаточные количества крови, не менее 10 мл у взрослых и 5 мл у детей в соотношении 1:10, преодолевая естественные бактерицидные свойства крови.

Посев проводится на несколько питательных сред одновременно:

1) "двойную среду"

2) "среду для контроля стерильности"

3) "полужидкую среду Тароцци"

4) "среду со стаканчиком"

5) жидкую среду Сабуро

6) среду Раппопорт.

Инкубирование проводят в течение 10 дней (до 6 педель) при 37 градусах по Цельсию с высевом па 3-й, 5-й, 8-й день. При отсутствии роста на 9-й- 10-й день дают отрицательный результат. В случае положительного результата проводят дальнейшую идентификацию с определением их свойств, типируя их, определяя чувствительность к антибактериальным препаратам.

Паразиты крови

I. Простейшие;

1. Плазмодии малярии (Plasmodium sp.)

2. Трипаносомы (Tripanosomosis africana - of americana)

3. Лейшмания ( Leischmaniosis visceralis)

4. Токсоплазмы (Toxoplasma gondii)

П. Спирохеты возвратного тифа (Borrelia sp.)

Исследование па простейшие осуществляется в топких мазках и толстой капле периферической крови, окрашенной но Романовскому.

Исследованию па малярию подвергаются лица, подозрительные па малярию, к которым относятся:

- температурящие лица и предъявляющие жалобы па недомогание и озноб, проживающие или прибывающие из эндемичных районов страны;

- температурящие с неустановленным диагнозом в течение 5 дней, в эпидсезон малярии - в первые 2 дня;

- при заболеваниях с продолжающимися периодическими подъемами температуры, несмотря на проводимое в соответствии с установленным диагнозом лечение;

- реципиенты при повышении температуры, развившемся в течение ближайших трех месяцев после переливания крови;

- лица, имеющие в анамнезе заболевание малярией в течение последних трех лет, - при любом заболевании с повышением температуры;

- российские и иностранные граждане, прибывшие из стран Африки, Азии, Южной и Центральной Америки, - в течение трех лет после приезда в Россию - по клиническим показаниям;

- лица с увеличенной печенью и селезенкой, желтушностью склер и кожных покровов, анемией неясной этиологии.

Согласно приказу N 171 от 27.04.1990 "Об эпидемическом надзоре за малярией".

Различают 4 вида плазмодиев малярии:

1. Трехдневный - Plasmodium vivax

2. Четырехдневный - Plasmodium malariae

3. Тропический - Plasmodium falciparum

4. Овальный - Plasmodium ovalae.

Толстая капля. Делают мазок крови более толстый и быстрым движением (чтобы мазок не успел высохнуть) влажной поверхностью этого мазка прикасаются к выступившей капле крови. При легких колебательных движениях стекла кровь на мазке распределяется в равномерный диск. Толстую каплю не фиксируют. Окрашивают по Романовскому 15-20 минут.

Тонкий мазок делается так же, как при подсчете форменных элементов крови, фиксируется метиловым спиртом 1,5-2 мин. или этиловым спиртом 10-20 минут. Окрашивают по Романовскому 30-40 минут.

Отрицательный ответ дается по толстой капле. Вид паразита устанавливается в тонком мазке, но может быть установлен и в толстой капле.

В ответе указывается вид возбудителя и степень паразитемии.

+ - 1-10 паразитов в 100 полях зрения

++ - 1-10 паразитов в 10 полях зрения

+++ - 1-10 паразитов в 1 поле зрения

++++ - более 10 в 1 поле зрения

+++++ -более 100 в 1 поле зрения

У P.falciparum указываются стадии паразита:

1) кольца

2) кольца + гаметоциты

3) гаметоциты

4) кольца + шизонты

Или считается количество паразитов на 100 лейкоцитов и пересчитывается на количество в 1 мкл. крови. Наличие только колец Р. falciparum свидетельст вует, что процесс - острый, наличие гамет и трофозоитов (кольца) говорит о том, что человек болей больше 10 дней, наличие одних геметоцитов может свидетельствовать о рекопвалесценции (они могут находиться в циркулирующей крови до 6 месяцев) обнаружение же шизонтов является плохим патономоничным признаком - больной находится в состоянии пре- или коме; за исключением иммунных лиц, которых на территории России нет.

Исследование патологии системы гемостаза является важным звеном в диагностике различных осложнений и проявлений в хирургии, акушерстве, гинекологии и т.д.

Система свертывания крови объединяет три основные направления своего изучения:

- систему гемостаза;

- антикоагулянтную систему;

- фибринолитическую систему.

Система гемостаза подразделяется на следующие звенья:

1. сосудисто-тромбоцитарное

2. коагуляционное

Патология сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза может проявляться как при нарушениях сосудистого генеза (например, геморрагические васкулиты, болезнь Рандю-Ослера, мезенхимальиые дисплазии, поражение сосудистой стенки при атеросклерозе, сахарном диабете, гипертонической болезни), так и при поражении тромбоцитарпого звена (тромбоцитопении).

Комплексным тестом, позволяющим оцепить оба компонента первичного звена гемостаза, является исследование длительности кровотечения.

Из множества предложенных методик наиболее распространенной является проба Дюка (нормальные значения 2-4 мин.).

Из великого множества лабораторных тестов коагуляционного звена гемостаза следует выделить следующие:

1. Тесты, определяющие общую коагуляционную активность, - такие, как

- время свертывания по Ли-Уайту (ВСК)

- активированное время рекальцификации (АВР)

- толерантность плазмы к гепарину (ТПГ)

- комплексный тест, оценивающий соотношение свертывающей и противосвертывающей системы.

2. Тест, характеризующий в основном внутренний путь образования протромбиназы - активизированное парциальное (частичное) тромбопластииовое время АПТВ (АЧТВ).

3. Тест, характеризующий в основном внешний путь образования протромбиназы - протромбиновое время (ПВ) и протромбиповый индекс (ПТИ).

4. Тесты, характеризующие конечный этап свертывания, II и III фазы: тромбновое время (ТВ) и концентрации фибриногена в плазме (Ф).

5. Тесты, характеризующие непосредственно активность факторов свертывания - VIII, IX, XIII и т.д.

Для оценки противосвертывающей системы принято определение активности антитромбина III и косвенное определение концентрации гепарина (тест "свободный гепарин").

Оценка свертывающей системы крови должна проводиться в комплексе с учетом всех направлений и звеньев гомеостаза.


урология | уролог | лечение простатита | лечение цистита



© Урология Москвы, 2007-2013 гг.